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解析Propac系列離子色譜柱的使用方法
更新時(shí)間:2022-06-20   點(diǎn)擊次數(shù):1230次
   Propac系列離子色譜柱是一款專用于單克隆抗體以及相關(guān)變異體分析的強(qiáng)陽離子交換柱,具有高柱效和高分離度的色譜柱。采用薄膜無孔核顆粒,能以高分離度和柱效分離蛋白變體,解析僅有單個(gè)帶電荷殘基差異的異構(gòu)體。親水層防止不需要的次級(jí)相互作用,一致的離子交換表面則提供基于電荷差異或者等電點(diǎn)的差異進(jìn)行快速傳質(zhì)的來實(shí)現(xiàn)高效分離和中等容量。應(yīng)用包括單克隆抗體?;饔?,脫酰胺作用,唾液酸化等引起的單抗的不均一性。
  
  Propac系列離子色譜柱在使用前,最好進(jìn)行柱的性能測(cè)試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測(cè)試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測(cè)試所使用的條件是最佳條件),只有這樣,測(cè)得的結(jié)果才有可比性。
  1、樣品的前處理:
  a、最好使用流動(dòng)相溶解樣品。
  b、使用前處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
  c、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。
  
  2、流動(dòng)相的配制:液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn):
  a、流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中(或長(zhǎng)時(shí)間保留在柱中)。
  b、流動(dòng)相具有一定惰性,與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。
  c、流動(dòng)相的黏度要盡量小,以便在使用較長(zhǎng)的分析柱時(shí)能得到好的分離效果;同時(shí)降低柱壓降,延長(zhǎng)液體泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度)。
  d、流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如使用UV檢測(cè)器,最好使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制。
  e、流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。
  f、在流動(dòng)相配制好后,一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè),還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
  
  3、流動(dòng)相流速的選擇:因柱效是柱中流動(dòng)相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。對(duì)于一根特定的色譜柱,要追求最佳柱效,最好使用最佳流速。對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對(duì)于內(nèi)徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。當(dāng)選用最佳流速時(shí),分析時(shí)間可能延長(zhǎng)??刹捎酶淖兞鲃?dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間(如使用反相柱時(shí),可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。

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